10ª PRÁCTICA
PRÁCTICA Nº 10: "DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES POR EL MÉTODO DE BIURET"
Fecha: 18/11/19
OBJETIVOS
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares ampliamente distribuidos en el organismo. Actúan como elementos estructurales y de transporte. Se dividen en dos fracciones, albúmina y globulinas.
Su determinación es útil en la detección de:
- Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento en la concentración de proteínas específicas.
- Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis proteica, perdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
FUNDAMENTO
En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia de sales de cobre: contiene yoduro como antioxidante.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra ensayada.
APARATAJE
[(A) Muestra: (A) Patrón] x 7 = g/dL de proteínas totales.
RESULTADOS
OBSERVACIONES
Fecha: 18/11/19
OBJETIVOS
- Aumentar la agilidad con las técnicas de pipeteo.
- Reforzar el manejo con el colorímetro.
- Medir la concentración de proteínas totales a partir de un suero de un paciente.
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares ampliamente distribuidos en el organismo. Actúan como elementos estructurales y de transporte. Se dividen en dos fracciones, albúmina y globulinas.
Su determinación es útil en la detección de:
- Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento en la concentración de proteínas específicas.
- Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis proteica, perdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
FUNDAMENTO
En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia de sales de cobre: contiene yoduro como antioxidante.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra ensayada.
APARATAJE
- Colorímetro ajustado a 546 nm.
- Baño termostático o baño María.
- Pipetas automáticas de 20-200 microlitros y de 100-1000 microlitros.
- Puntas de pipeta azules y amarillas.
- Gradilla.
- 5 tubos de ensayo de 3 ml cada uno.
- Tapones azules para los tubos de ensayo.
- Cubetas de fotometría.
- Suero heparinizado.
- R (TOTAL PROTEIN): Biuret que contiene potasio sodio, yoduro sódico, yoduro de potasio, sulfato de cobre (II), hidróxido de sodio.
- T PROTEIN CAL: Patrón primario de Albúmina Bovina.
- Encender el colorímetro y ajustarlo a 0 frente a agua destilada.
- Colocar 1000 microlitros del reactivo TOTAL PROTEIN en el tubo previamente rotulado como "Blanco", otros 1000 microlitros en el tubo de "Patrón" y otro mililitro en el tubo de la "Muestra". Todo ello con puntas de pipeta azules.
- Seguidamente, depositar 25 microlitros de T PROTEIN CAL en el tubo de "Patrón". Con la pipeta de 20-200 microlitros y puntas amarillas.
- A continuación, introducir 25 microlitros del suero heparinizado en el tubo de la "Muestra".
- Tapar los tubos de ensayo con tapones y mezclar de forma suave cada uno de ellos (en la siguiente foto podemos observar la Muestra).
- Incubarlos 5 minutos a 37ºC en el baño María.
- Introducir la disolución de la muestra en la cubeta de fotometría, limpiar sus paredes lisas para evitar cualquier interferencia e introducirla en el colorímero previamente ajustado a 546 nm y una vez realizada la medición del Blanco y del Patrón.
[(A) Muestra: (A) Patrón] x 7 = g/dL de proteínas totales.
RESULTADOS
OBSERVACIONES
- Hemos realizado un blanco y un patrón por mesa.
- Una muestra por persona de cada grupo.
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