4ª PRÁCTICA
PRÁCTICA Nº 4: "REFRACTÓMETRO"
Fecha: 14/10/19
OBJETIVOS
Cuando la luz pasa de un medio aéreo a otro líquido, sufre un fenómeno denominado REFRACCIÓN (supone la desviación de la dirección inicial del rayo luminoso), puede ser utilizado en el laboratorio para medir la densidad de una disolución problema (suero, plasma, orina).
La refractometría es "una técnica analítica que determina la densidad de una disolución en base a la modificación que dicha densidad induce en su índice de refracción". Para llevarla a cabo se necesita de un instrumento óptico denominado refractómetro.
El ángulo de refracción de la luz en un líquido cualquiera (o índice de refracción) viene dado por la relación existente entre la velocidad de la luz en el vacío y la velocidad de la luz en el líquido en cuestión. Como la velocidad de la luz en el líquido es inversamente proporcional a su densidad, podemos concluir diciendo que el índice de refracción dela muestra es proporcional a su densidad. En el caso de suero o plasma, la densidad depende fundamentalmente de su concentración en proteínas; en el caso de la orina depende sobre todo de su concentración en electrolitos.
APARATAJE
Componentes:
- Fuente luminosa: por lo general, utilizamos luz visible y blanca. Puede ser luz ambiental o luz procedente de una lámpara de sodio, mercurio o hidrógeno; en nuestro caso, hemos utilizado luz ambiental.
- Prisma de refracción: está construido con cristal que tiene un alto índice de refracción. Las muestras se aplican directamente sobre él.
- Equipo óptico: permite enfocar la luz que emerge del prisma de refracción.
- Sistema de lectura: suele consistir en una escala graduada donde se dirige la luz procedente del prisma, una vez enfocada por el equipo óptico.
Opcionalmente, los refractómetros pueden disponer de un sistema de compensación de la temperatura consistente en un fluido termostatizado que circula alrededor de la muestra, manteniéndola a una temperatura constante.
Los refractómetros habitualmente utilizados en el laboratorio clínico no disponen de lámpara (por lo que hay que orientarlos hacia una buena fuente de luz natural) ni de sistema de compensación de la temperatura (por lo que debemos realizar correcciones).
MATERIALES
Teniendo en cuenta que el refractómetro está calibrado para medir el ángulo de refracción de la luz a una temperatura convencional de 20ºC, se puede calcular la densidad de una muestra problema (suero, en este caso) siguiendo los pasos que se indican a continuación:
Fecha: 14/10/19
OBJETIVOS
- Uso del refractómetro para la determinación de la concentración (g/100ml) de proteínas, suero y orina a través de una muestra de un paciente.
- Esta práctica tiene como finalidad el conocimiento del uso del refractómetro y saber interpretar los resultados que nos proporciona en 3 escalas correspondientes a 3 parámetros diferentes.
Cuando la luz pasa de un medio aéreo a otro líquido, sufre un fenómeno denominado REFRACCIÓN (supone la desviación de la dirección inicial del rayo luminoso), puede ser utilizado en el laboratorio para medir la densidad de una disolución problema (suero, plasma, orina).
La refractometría es "una técnica analítica que determina la densidad de una disolución en base a la modificación que dicha densidad induce en su índice de refracción". Para llevarla a cabo se necesita de un instrumento óptico denominado refractómetro.
El ángulo de refracción de la luz en un líquido cualquiera (o índice de refracción) viene dado por la relación existente entre la velocidad de la luz en el vacío y la velocidad de la luz en el líquido en cuestión. Como la velocidad de la luz en el líquido es inversamente proporcional a su densidad, podemos concluir diciendo que el índice de refracción dela muestra es proporcional a su densidad. En el caso de suero o plasma, la densidad depende fundamentalmente de su concentración en proteínas; en el caso de la orina depende sobre todo de su concentración en electrolitos.
APARATAJE
- Refractómetro: Zuzi
Componentes:
- Fuente luminosa: por lo general, utilizamos luz visible y blanca. Puede ser luz ambiental o luz procedente de una lámpara de sodio, mercurio o hidrógeno; en nuestro caso, hemos utilizado luz ambiental.
- Prisma de refracción: está construido con cristal que tiene un alto índice de refracción. Las muestras se aplican directamente sobre él.
- Equipo óptico: permite enfocar la luz que emerge del prisma de refracción.
- Sistema de lectura: suele consistir en una escala graduada donde se dirige la luz procedente del prisma, una vez enfocada por el equipo óptico.
Opcionalmente, los refractómetros pueden disponer de un sistema de compensación de la temperatura consistente en un fluido termostatizado que circula alrededor de la muestra, manteniéndola a una temperatura constante.
Los refractómetros habitualmente utilizados en el laboratorio clínico no disponen de lámpara (por lo que hay que orientarlos hacia una buena fuente de luz natural) ni de sistema de compensación de la temperatura (por lo que debemos realizar correcciones).
MATERIALES
- Papel para limpiar el prisma del refractómetro cada vez que se cambie la sustancia a medir (calibración: agua destilada y para medir los 3 parámetros: muestra del paciente).
- Muestra del paciente a medir.
- Pipeta Pasteur para colocar una o dos gotas de agua o muestra.
- Agua destilada.
- Tubo de orina (como contenedor de desechos) para tirar la pipeta Pasteur una vez utilizada.
Teniendo en cuenta que el refractómetro está calibrado para medir el ángulo de refracción de la luz a una temperatura convencional de 20ºC, se puede calcular la densidad de una muestra problema (suero, en este caso) siguiendo los pasos que se indican a continuación:
- Realizar una calibración con agua destilada a la misma temperatura que la muestra; para ello se coloca una o dos gotas de agua destilada en el prisma del refractómetro con ayuda de la pipeta Pasteur, se cierra su tapa y, mirando por el ocular, se hace una puesta a cero.
- Limpiar y secar el agua.
- Situar de nuevo una o dos gotas de la muestra problema (suero) en el prisma con otra pipeta Pasteur.
- Cerrar la tapa.
- Ajustar el ocular y determinar las concentraciones (en g/100 ml) de las 3 escalas (proteínas, suero y orina).
- Concentración de proteínas: 8'5 g/100 ml aproximadamente.
- Densidad de suero: 1.351 y medio g/100 ml aproximadamente.
- Concentración de orina: la línea de agua sobrepasa la escala.
- Si el líquido de calibración y la muestra no se encuentran a la misma temperatura, debemos corregir el resultado añadiendo 0'001 unidades por cada 3ºC de subida de temperatura de la muestra con respecto al calibrador (o restándolas, si la temperatura de la muestra es más baja que la del calibrador).
- Los resultados leídos en un refractómetro se ven muy afectados por los cambios de temperatura, para minimizar estos efectos los refractómetros están protegidos con una empuñadura de goma.
- Algunos modelos incluyen C.A.T.(compensación automática de la temperatura) lo que permite obtener los resultados de las mediciones diréctamente independientemente de la temperatura ambiental a la que nos encontremos. (Siempre se autocompensan los resultados de las mediciones a 20ºC).
- Hemos dispuesto de 2 refractómetros para realizar la medición:
- Refractómetro negro: que disponía de la escala de suero a la izquierda, la de las proteínas en el centro y la de la orina en el lado derecho.
- Refractómetro azul (en mi caso): el cual dispone de la escala de proteínas en el lado izquierdo, la del suero en el centro y la de la orina en el lado derecho.
Comentarios
Publicar un comentario