9ª PRÁCTICA

PRÁCTICA Nº 9: "MEDICIÓN DE HEMOGLOBINA GLICOSILADA"
Fecha: 14/11/19

OBJETIVOS

• Conocer el mecanismo de uso del aparato NycoCard READER II.
• Medición en porcentaje de la hemoglobina glicosilada con respecto al total de hemoglobina.

UTILIDAD CLÍNICA

• NycoCard HbA1c es un test de diagnóstico in vitro para medir de una forma rápida la hemoglobina glicosilada en la sangre humana. Se recomienda medir el HbA1c como marcador de control metabólico a largo plazo en las personas con diabetes mellitus.

FUNDAMENTOS
NycoCard HbA1c es un test de afinidad del boronato.
El kit contiene varias placas de test compuestas por un filtro de membrana porosa, contiene también tubos de ensayos llenos de reactivo y una solución de lavado. Los reactivos contienen sustancias que rompen los eritrocitos y producen una precipitación específica de la hemoglobina, luego un conjugado de ácido bórico acoplado a un colorante azul se fija a las configuraciones cis-diol de la hemoglobina glicosilada.

Cuando la sangre es adicionada al reactivo, los eritrocitos son inmediatamente lisados y la hemoglobina total precipita. El conjugado de ácido bórico se une inmediatamente a la configuración cis-diol de la hemoglobina glicosilada. Una alícuota de esta mezcla con el reactivo es aplicada sobre la placa del test y la hemoglobina total libre o conjugada permanece en el filtro. 

Todo el exceso de conjugado coloreado es eliminado por la solución de lavado. El precipitado es valorado por la medida de la intensidad de la coloración azul (hemoglobina glicosilada) o roja (hemoglobina total) en el medidor NycoCard READER II la lectura obtenida es proporcional al porcentaje de HbA1c en la muestra.

APARATAJE

• NycoCard READER II

Es un densitómetro de color alimentado por una pequeña batería, diseñado para medir todos los productos de la gama NycoCard.
Las respuestas de color a los productos de la gama NycoCard son medidas por reflectancia espectral en las tres partes de un espectro bien visible.
NycoCard READER II contiene dos unidades diferenciales: el aparato que es la parte operativa y de cálculo de la unidad y el lápiz lector que es la parte de medición de la unidad.

Componentes principales:

• Micro-computadora
• Pantalla visor LCD
• Teclas de funciones

Elementos clave del Lápiz lector:

• Diodos Emisores de Luz (LED's)
• Fotodiodo
• Detector de claros-oscuros
• Diseño funcional

El lápiz lector contiene 3 pares de diodos LED's: rojo, verde y azul.
La luz reflejada desde la muestra del test es medida en relación a una muestra en blanco por medio de un circuito fotodiodo sensible a la luz.

Método operativo:
Antes de obtener el resultado de los test NycoCard se deben realizar estos tres pasos:

1. Ajuste

Poner en marcha el aparato pulsando el botón Select/On asegurándose que el lápiz lector está situado en su soporte. El aparato realizará el ajuste automáticamente. Evitar tocar el lápiz lector mientras se completa la realización del ajuste. Cuando se escuche un "beep" significará que el ajuste se ha completado de forma correcta.Cuando se escucha un doble "beep" indicará que hay errores en el proceso de ajuste y entonces aparecerá en la pantalla/visor el mensaje "Ajustar error".

2. Calibración del color blancoPresionar el botón ENTER para activar el menú y seguir las instrucciones que indica la pantalla/visor. Cuando aparece en la pantalla el mensaje "Colocar lápiz", se debe sacar el lápiz lector de su soporte y se colocará sobre el Dispositivo de Calibración al Color Blanco. Se debe mantener el lápiz lector firmemente hasta que se escuche un "beep" que indicará que la calibración ha finalizado.

3. Medida de un test NycoCard
Siempre se debe utilizar la almohadilla al realizar las medidas. Del Menú principal introducir test se elige el test adecuado y entonces el aparato está listo para iniciar las medidas. Cuando la boquilla del lápiz lector se situe sobre el agujero del test y el manguito del lápiz lector se deslice hacia abajo se iniciará la medida. Después de unos segundos aparecerá en la pantalla el resultado como un valor de concentración.
Posibles causas de resultado erróneos:
Valores obtenidos más bajos de los esperados, resultados altos inesperados, solución de lavado o R2 no penetre en la membrana TD, concentración de Hb muy baja o reducción de concentración de Hb.

MATERIALES

• Gradilla.
• Pipeta automática de 5 microlitros.
• Pipeta automática de 25 microlitros.
• Puntas amarillas.
• Tubo de desechos.
• Disco de TD/Dispositivo-test.
  

REACTIVOS

• R1/Reactivo.
• R2/ Solución de lavado.

MUESTRA

• Sangre venosa con anticoagulante EDTA.

PROCEDIMIENTO

1. Preparación de la muestra: Añadir 5 microlitros de sangre completa en el tubo de ensayo prellenado con el R1/Reactivo. Mezclar bien y dejar reposar durante 2 minutos pero sin superar los 3 minutos.
   Nota: Atemperar el R1/Reactivo a temperatura ambiente antes de usarlo. Asegúrese de que el tubo capilar está completamente vacío después de la mezcla.
   
   
   
   
   
   
   
2. Aplicación de la muestra: Mezclar nuevamente con el fin de obtener una suspensión homogénea. Depositar 25 microlitros de la mezcla sobre el TD/Dispositivo-test manteniendo la micropipeta separada al menos 0'5 cm de la placa del test. Dejar penetrar completamente la mezcla reactiva en la membrana del dispositivo. Espere un mínimo de 10 segundos.
   Nota: evite la formación de burbujas de aire.
   
3. Aplicación de la R2/Solución de lavado: Añadir 25 microlitros de ésta sobre la placa dispositivo, dejar penetrar la solución de lavado completamente sobre la membrana. Espere un mínimo de 10 segundos.
   Nota: evite que se formen burbujas de aire.
   
4. Lectura del resultado: Lea el resultado dentro de los 5 minutos siguientes utilizando NycoCard READER II como ya hemos explicado anteriormente.
   

RESULTADOS

• 4'5% de hemoglobina glicosilada con respecto el total de hemoglobina.

Este valor se encuentra dentro de los rangos normales.